А.Е.Смирнов Опыт использования металлографического микроскопа для фотографирования биологических объектов Страница изменена Форум   Назад

АННОТАЦИЯ В работе описана методика получения спорового отпечатка, пригодного к микроскопическим исследованиям, и его фотосъёмки, а также приведены результаты микроскопического анализа спор грибов различных видов, произрастающих в Подмосковье.   Цели проводимой работы: получение практического опыта использования металлографического микроскопа для фотографирования грибных спор; пополнение базы данных грибов новой информацией о размерах, форме и цвете грибных спор; получение дополнительной информации для идентификации вида; получение эстетического удовольствия от созерцания многообразных форм и расцветок спор грибов. Для достижения названных целей были поставлены и решены следующие задачи: освоена методика получения спорового отпечатка, пригодного для микроскопического исследования; освоена методика фотосъёмки полученного спорового отпечатка. Введение   В научно-популярной литературе [Л] и Интернете приводятся весьма скудные данные о размере, формах и цвете спор грибов. Фотографий грибных спор мало, они разрознены и не систематизированы. Эти причины побудили автора к проведению нижеизложенных исследований.   Методика фотосъёмки   Для микроскопических исследований спор грибов применяли металлографический микроскоп NEOPHOT-21 (рис. 1) . Использовали увеличения от x 125 до x 1000. Фотографирование осуществляли с использованием цифрового фотоаппарата SONY DSC-W15, оснащённого адаптером для подключения к тубусу микроскопа. Штатный окуляр микроскопа x 12,5 заменяли на меньший по длине окуляр x 15. Таким образом, увеличение при фотосъёмке составляло от x 150 до x 1200.   Для получения информации о масштабе цифровой фотографии и размерах спор в фотоизображение внедряли фотографию объект-микрометра с ценой деления 10 мкм, выполненную при том же увеличении.   Для фотографирования биологических (прозрачных и полупрозрачных) объектов, к которым относятся споры грибов, металлографический микроскоп (работающий на отражение) пригоден лишь в ограниченном числе случаев. В частности, контрастно окрашенные споры должны высеваться на качественную белую бумагу. Основной недостаток метода очевиден - ограниченная область применения - можно исследовать и фотографировать только тёмноокрашенные споры. Кремовые и жёлтые споры не дают возможности достичь желаемого контраста.   Использование чёрной бумаги для исследования светлоокрашенных (бесцветных) спор не дало приемлемых результатов в силу того, что чёрная бумага окрашена в массе, а единичные волокна - полупрозрачны. Как следствие - низкий контраст получаемого изображения.   Второй недостаток метода - малая глубина резкости оптического микроскопа, которая не позволяет достичь приемлемых результатов при фотографировании спор, высеиваемых на бумагу, которая, как известно, обладает неровной поверхностью. В этом случае фиксируется чёткое изображение только отдельных спор, или части единичной споры. Результат, полученный при съёмке спор Cortinarius triumphans (рис. 2) , представлен на рис. 3. Удовлетворительное качество можно получить путём слияния нескольких изображений, полученных при съёмке с различными настройками резкости микроскопа (см. рис. 3, в).   Однако рассматриваемый метод имеет одно немаловажное достоинство. Поскольку освещающий пучок света отражается от белой бумаги, он дважды проходит через грибные споры. Это определяет хорошую цветопередачу окраски спор.   Более приемлемые результаты были получены при исследовании грибных спор, высеиваемых на покровное стекло. При этом практически все споры находятся в области резкого изображения микроскопа. Однако в этом случае невозможно получить контрастное фотоизображение тёмноокрашенных спор. Удовлетворительные результаты возможны только при фотографировании светлоокрашенных спор (например, Russula foetens, рис. 4) на тёмном фоне покровного стекла (рис. 5). Однако и этому методу присущи недостатки, один из которых - ореолы вокруг светлых элементов изображения - хорошо заметен на рис. 5.   Существенное расширение возможностей металлографического микроскопа возможно при его использовании "на просвет". В этом случае можно исследовать и фотографировать любые, как тёмно-, так и светлоокрашенные споры.   Для расширения функциональных возможностей металлографического микроскопа он был оснащён дополнительным осветителем на основе галогенной лампы мощностью 20 Вт. Дополнительный осветитель размещали так, чтобы обеспечить прохождение света через изучаемый объект. При этом штатный осветитель, работающий на отражение, отключали.   Между осветителем и изучаемым объектом размещали матовое стекло, предотвращающее появление интерференционных колец на изображении. На рис. 6 и 7 представлены фотографии спор с таким дефектом.         Далее...